規(guī)模養(yǎng)豬場疫病抗體水平監(jiān)測及免疫效果分析

　　隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)規(guī)�；�、集約化和商品化程度的增高，畜禽流動和引種工作的頻繁，一些疾病的發(fā)生、發(fā)展變得越來越復(fù)雜。一些疫病屢控不止，時有起伏；部分傳統(tǒng)疫病非典型化且臨床癥狀日漸復(fù)雜；新的病毒感染性疫病日漸增多；一些傳染病的免疫失敗經(jīng)常發(fā)生，引起獸醫(yī)工作者極大的關(guān)注。豬瘟是嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)最古老的疾病之一，近年來，非典型化豬瘟逐漸增多。豬偽狂犬病(PR)自1902年首先在匈牙利發(fā)現(xiàn)以來，世界上已有50多個國家存在，我國有20多個省、市流行本病，近來呈不斷蔓延之勢。豬藍(lán)耳病又稱豬繁殖和呼吸綜合征(PRRS)，可感染各種年齡階段豬。自1987年在美國首次發(fā)現(xiàn)以來，隨后加拿大、德國、荷蘭、英國、法國、日本等陸續(xù)報道本病流行。我國除臺灣外，1996年才報道，但短短幾年時間，很多省份都報道本病不同程度存在。近來，很多大型豬場均發(fā)生以母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔、木乃伊胎等病例，大多由該病原引起。為了摸清規(guī)模豬場中豬瘟抗體水平和免疫狀況，豬偽狂犬病、豬藍(lán)耳病陽性率和分布情況，有重點(diǎn)地開展相應(yīng)的免疫預(yù)防，我們檢測了杭州市24個規(guī)模豬場911份血清中的豬瘟、豬偽狂犬及豬藍(lán)耳病抗體，現(xiàn)報道如下。

　　1 材料和方法

　　隨機(jī)取樣，采自杭州地區(qū)24個規(guī)模養(yǎng)豬場(未經(jīng)豬偽狂犬病及豬藍(lán)耳病疫苗免疫)，其中母豬血清621份，肥育豬207份，種豬(此處專指種公豬，以下同)83份，血清分離后置冰箱2l℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　豬瘟正向間接血凝抗原、陰性和陽性血清，購自中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，試劑批號為：2001019。

　　豬偽狂犬病、豬藍(lán)耳病ELISA診斷試劑盒購自美國IDEXX公司，試劑批號為06685-330FT和09265-089HT。

　　96孔血凝板，購自浙江華東醫(yī)藥公司。

　　豬瘟血清抗體水平的檢測，采用正向血凝試驗(yàn)。具體操作步驟如下：即在％孔血凝板上，每孔加入50ul稀釋液，每排第1孔加入待檢血清50ul，遞比稀釋待檢血清至血清濃度為1：512，最后50ul丟棄。再在每孔加入抗原診斷液25ul，置濕盒中于25℃孵育1.5-3h，判定結(jié)果。

　　判定標(biāo)準(zhǔn)：凡能使50％的紅細(xì)胞凝集的血清最大稀釋倍數(shù)為該份血清的抗體效價，豬瘟血清抗體效價高于或等于1：16視為免疫合格。

　　豬偽狂犬病、豬藍(lán)耳病抗體檢測參照美國IDEXX公司ELISA診斷試劑盒說明書進(jìn)行。待檢血清分別作1：20(豬偽狂犬病抗體檢測)和1：40(豬藍(lán)耳病抗體檢測)稀釋。取稀釋好的待檢血清100ul加入包被好的96孔聚苯乙烯診斷試劑盒中，置濕盒內(nèi)25℃作用30min，取出，用洗滌液充分洗滌3-5次，甩盡殘留液體，每孔加入酶標(biāo)抗體100ul，濕盒內(nèi)2.5℃作用30min，洗滌。再在每孔中加入TMB底物溶液100ul，濕盒內(nèi)25℃；作用15min后，加入終止液100ul，立即置BIO-RAD550型酶標(biāo)儀上650nm處測定。分別按所附計算公式判定是否為血清抗體陽性。 

　　2 結(jié)果

　　2.1豬瘟的免疫狀況

　　母豬、肥育豬、種豬豬瘟血清抗體效價如表1所示。在所測試的608份母豬血清中，有3份(0.49％)血清樣品檢測不到豬瘟抗體，45份樣品豬瘟血清抗體低于1：8，占檢測總數(shù)的7.4％；有563份樣品豬瘟血清抗體大于或等于1：16，占92.6％；在所測試的157份肥育豬血清中，大于或等于1：16的血清份數(shù)為98，免疫合格串為62.4％；78份種豬血清中，有61份血清抗體水平高于或等于1：16，占總數(shù)的韶.2％。豬瘟免疫合格率排列順序?yàn)槟肛i>種豬>肥育豬。

　　豬血清中豬瘟抗體效價分布和免疫效果。在所有的843份豬血清中，有5份豬瘟血清抗體效價為0，占總數(shù)的0.6％，有722份豬瘟血清抗體水平高于、等于1：16，免疫合格率為85.64％。所調(diào)查的24個大型豬場，豬瘟免疫效果相差較大，免疫合格率為57.14％―100％不等。但絕大多數(shù)場免疫水平較高，有14個豬場豬瘟免疫合格率大于或等于90％。以豬場豬免疫合格率大于80％以上計為豬場免疫合格，則有凹個豬場豬瘟免疫合格，占83.33％。

　　可見，規(guī)模豬場豬瘟的免疫效果還是比較好的，具體結(jié)果見表1、2。

　　表1 母豬、肥育豬和種豬豬瘟血清抗體效價及其分布

抗體　　　　　　血清份數(shù)　　　　　　　　 所占百分比／％

效價　　-------------------------- ---------------------------

　　　　母豬 肥育豬 種豬 合計 母豬 肥育豬 種豬 平均

1:0　　 3　　 2　　　　　　 5　　 0.5　　1.3　　 0　　 0.6

1:2　　 3　　 2　　　　1　　 6　　 0.5　　1.3　　 1.3 0.7

1:4　　 5　　 19　　 8　　 32　　 0.8　　12.1　　10.3 3.8

1:8　　 34　　 36　　 8　　 78　　 5.6　　22.9　　10.3 9.3

1:16　　58　　 38　　 15　　 111　　9.5　　24.2　　19.2 13

1:32　　86　　 24　　 8　　 118　　14.1 15.3　　10.3 14

≥1:64 419　　36　　 38　　 493　　68.9 22,9　　48.7 58.5

合計　　608　　157　　 78

表2 24個規(guī)模豬場豬瘟免疫狀況

免疫合格率／％　　豬場數(shù)　　占百分比／％

-----------------------------------------　　

90-100　　　　　　14　　　　 58.3

80-90　　　　　　 6　　　　 25

70-80　　　　　　 1　　　　 4.2

60-70　　　　　　 1　　　　 4.2

≤60　　　　　　 2　　　　 8.3

　　2.2 豬偽狂犬病抗體陽性檢出率

　　在所檢測的24個規(guī)模場中，共有20個場檢測出偽狂犬病抗體，占總數(shù)的83.33％。911份血清中，365份血清呈偽狂犬病抗體陽性，占整個檢測樣品的40.07％，其中母豬、肥育豬、種豬偽狂犬病抗體陽性率分別為50.24％、29％、24％。

　　具體結(jié)果見表3。

　　表3 PRV及PRRSV血清抗體陽性檢出率

豬種　　　　　　 PRV抗體　　　　　　　　 PRRSV抗體

　　　　 -----------------------　　--------------------

　　　　　　 陽性數(shù)　　陽性率／％　　陽性數(shù)　　陽性率／％

母豬　　　　 312　　 50.24　　　　 220　　 35.4

肥育豬　　 29　　　　14.01　　　　 100　　 48.3

種豬　　　　 24　　　　28.9　　　　 42　　　　50.6

合計　　　　 365　　 40.07　　　　 362　　 39.74

　　2.3 豬藍(lán)耳病抗體陽性檢出率

　　24個規(guī)模場中，共有17個場檢測出藍(lán)耳病抗體，場陽性率達(dá)70.33％。在911份血清中，豬藍(lán)耳病抗體陽性份數(shù)為362份，占39.74％，與偽狂犬病相差無幾。其中母豬、肥育豬、種豬陽性率分別為35.4％、48.3％、50.6％。具體見表3。

　　3 討論

　　本研究表明，從整體上看豬瘟的免疫狀況較好，以豬瘟抗體間接血凝價在1：16以上時能抵抗強(qiáng)毒感染為參考，大多數(shù)豬場和豬群能達(dá)到這個水平。但也有部分豬場的少數(shù)豬，豬瘟抗體滴度低下，不足以抵抗強(qiáng)毒侵襲而發(fā)病或成為隱性帶毒者，威脅易感豬群。這可能與豬瘟疫苗免疫程序不合理和免疫質(zhì)量不好有關(guān)。

　　調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，豬偽狂犬病抗體陽性場達(dá)20個，占整個調(diào)查場數(shù)的83.33％。其中母豬抗體陽性率非常高，為50.24％，種豬、肥育豬分別為14.01％和28.9％，情況非常嚴(yán)峻。近期，很多豬場均發(fā)生以母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱仔及仔豬出生后幾日內(nèi)急性死亡病例，經(jīng)診斷大多為此病引起。由于偽狂犬病可感染各種年齡階段豬，又可致豬隱性帶毒；近來，其毒力和侵襲力有呈動態(tài)的持續(xù)漸增趨勢，并且，病毒的傳染鏈中有鼠類參與，給凈化和凈化保持帶來了相當(dāng)?shù)碾y度。實(shí)驗(yàn)室和田間試驗(yàn)都已證明PR野毒間、野毒與活苗毒株有重組現(xiàn)象。有些場采用滅活苗和基因缺失苗免疫接種，效果欠佳。但不論怎樣，小群內(nèi)清除感染，使用基因工程致弱活毒苗及相容的血清學(xué)試驗(yàn)來區(qū)分疫苗抗體和野毒感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體是必要的�？偟膩碚f，對豬偽狂犬病陽性豬場和受威脅豬場建議使用疫苗，但應(yīng)同時加強(qiáng)血清抗體監(jiān)測，監(jiān)測疾病流行情況和發(fā)病區(qū)域。非流行場應(yīng)以清除感染豬只為主，加強(qiáng)凈化。

　　前幾年我省較為少見的豬藍(lán)耳病，近來發(fā)病率漸增。此次調(diào)查顯示，24個規(guī)模養(yǎng)殖場，豬藍(lán)耳病抗體陽性場達(dá)17個。在所調(diào)查的911頭豬血清樣品中，母豬藍(lán)耳病抗體陽性率為35.4％，肥育豬為48.3％，種豬為50.6％。由于本病主要引起豬繁殖障礙，癥狀易與豬偽狂犬病、豬瘟混淆，病毒易于扁桃體、上呼吸道和肺泡內(nèi)巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞內(nèi)寄生復(fù)制，降低豬體免疫力。進(jìn)而繼發(fā)或伴發(fā)其他病原微生物如衣原體、豬鏈球菌、副嗜血桿菌、豬放線桿菌等感染，加劇病情，導(dǎo)致臨床癥狀變化多樣、死亡率升高，給本病的確診帶來很大困難。PRBS病毒在扁桃體和肺內(nèi)可存在3周到1年的時間，康復(fù)豬通過呼吸道、唾液腺、糞便、尿及精液散毒。在以后的3-6個月或更長的時間內(nèi)可能成為其他豬感染的來源，造成該病的持續(xù)存在。因此，加強(qiáng)對該病的診斷試劑和防制措施的研究乃當(dāng)務(wù)之急。目前，對該病的防治由于無特效藥，仍以預(yù)防為主。同時，PRRSV是抗體依賴性感染病毒，因此，在生產(chǎn)中盲目使用疫苗特別是弱毒疫苗是不可取的。應(yīng)加強(qiáng)豬群的血清學(xué)監(jiān)測，特別是引種過程中的檢測，堅持豬群全進(jìn)全出制，嚴(yán)格隔離、檢疫、消毒工作，逐步淘汰陽性豬，進(jìn)而達(dá)到凈化目的。

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