飼料中β-受體激動(dòng)劑的控制與檢測方法
2013-11-3 飼料人才網(wǎng)
3 控制與檢測
3.1 控制
一連串因食用含瘦肉精的食物而中毒的事件發(fā)生后,鹽酸克倫特羅成為世界上普遍禁用的添加劑。1997年以來,我國農(nóng)業(yè)部等相關(guān)部門多次發(fā)文,如:《關(guān)于嚴(yán)厲打擊非法生產(chǎn)經(jīng)營和使用鹽酸克倫特羅等藥品違法行為的通知》(農(nóng)牧發(fā)14號(hào)),禁止在畜牧業(yè)中使用此類藥物。然而,由于經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使,生產(chǎn)上仍存在著非法濫用的現(xiàn)象。
3.2 分析檢測
目前,萊克多巴胺的檢測方法主要有色譜法、毛細(xì)管電泳法和酶免疫分析法等,酶免疫分析法中基本上都用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)。
3.2.1 ELISA
ELISA法一般用稀酸溶液提取,離心,調(diào)pH,用樣品稀釋液稀釋并檢測。檢測過程中注意提取液的pH,一般要求在6.5~7.5,在所有恒溫孵育過程中避免光線照射。目前,用ELISA檢測飼料中的β-受體激動(dòng)劑主要有克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇,常用的試劑盒品牌有“北京望爾”、“美國柏爾”和“英國朗道”等,靈敏度可達(dá)ng/g水平,可以滿足篩選分析的要求。
3.2.2 高效液相色譜法(HPLC)
HPLC是β-受體激動(dòng)劑常見的測定方法,分析時(shí)不需要衍生,利用β-腎上腺素能激動(dòng)劑分子可與C18或C8固定相分子相互作用的原理進(jìn)行分離。通常采用緩沖溶液和乙腈配置流動(dòng)相,等溶劑或梯度洗脫來進(jìn)行樣品預(yù)處理。目前,我國已將HPLC法作為檢測鹽酸克倫特羅殘留的半確證性方法。其優(yōu)點(diǎn)是專屬性好、選擇性強(qiáng)和檢測精確度較高,而且假陽性率低;缺點(diǎn)是樣品處理時(shí)間長,檢測過程繁瑣。相關(guān)標(biāo)準(zhǔn):《飼料中鹽酸克倫特羅的測定》(NY438-2001)。此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中鹽酸克倫特羅含量的測定,HPLC檢測限為0.05mg/kg;《飼料中萊克多巴胺的測定高效液相色譜法》(GB/T20189-2006)。此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中萊克多巴胺含量的測定,檢測限為0.5μg/g。
3.2.3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)
此法優(yōu)點(diǎn)是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)結(jié)合起來,并且能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性和定量分析,而且具更高的檢測極限。但是由于GC-MS要求樣品有較低的沸點(diǎn)且相對(duì)熱穩(wěn)定性,而β-受體激動(dòng)劑的極性大,沸點(diǎn)高,不宜直接用于分析,故測定前要對(duì)分子上羥基和氨基等極性基團(tuán)衍生化,主要有硅烷化和環(huán)化衍生2種。GC-MS法與HPLC法相比,檢測靈敏度更高,假陽性率更低。因此,我國將GC-MS法定為檢測鹽酸克倫特羅的確證性方法。相關(guān)標(biāo)準(zhǔn):《飼料中鹽酸克倫特羅的測定》(NY438-2001)。此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中鹽酸克倫特羅含量的測定,GC-MS法檢測限為0.01mg/kg;《飼料中沙丁胺醇的測定-氣相色譜法/質(zhì)譜法》(NY/T1030-2006),此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中沙丁胺醇含量的測定,最低檢測質(zhì)量濃度為0.02mg/kg;《飼料中西馬特羅的測定-氣相色譜法/質(zhì)譜法》(NY/T1033-2006),此法適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中西馬特羅含量的測定,最低檢測質(zhì)量濃度為0.05mg/kg;《飼料中8種β-受體激動(dòng)劑的檢測氣相色譜-質(zhì)譜法》(農(nóng)業(yè)部1063號(hào)公告-7-2008)。本法適用于配合飼料中氯丙那林、馬布特羅、特布他林、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、齊帕特羅、班布特羅和萊克多巴胺的測定。其定量限和檢出限:萊克多巴胺為0.5和0.1mg/kg,其他7類藥物分別為0.05和0.01mg/kg。
3.2.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS-MS)
在液相色譜檢測時(shí)使用質(zhì)譜檢測器可以大大降低檢測限,尤其是二級(jí)質(zhì)譜可以作為特異性檢測器,也可以彌補(bǔ)色譜上分離的不足。但由于此法的靈敏度高,要求上機(jī)樣液質(zhì)量濃度相對(duì)較低,為避免儀器過載,對(duì)于含量高的樣品要進(jìn)行多次稀釋,這樣會(huì)造成結(jié)果偏差較大。相關(guān)標(biāo)準(zhǔn):《飼料中13種β-受體激動(dòng)劑的檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》(農(nóng)業(yè)部1063號(hào)公告-6-2008)。本法適用于飼料中氯丙那林、馬布特羅、特布他林、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、齊帕特羅、班布特羅、萊克多巴胺、溴布特羅、克倫普羅和妥布特羅的測定。其檢出限和定量限分別為0.01和0.05mg/kg。
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