蔬菜農(nóng)藥殘留的現(xiàn)狀與檢測技術(shù)的概況

    蔬菜作為日常生活的主要食品，其農(nóng)藥殘留等質(zhì)量安全，直接關(guān)系到人民群眾的身體健康及生命安全。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中鑒于目前我國出現(xiàn)的蔬菜安全性問題以農(nóng)藥殘留污染最為常見和嚴重，其中尤以有機磷農(nóng)藥殘留超標最為突出，監(jiān)控農(nóng)藥的合理使川，杜絕農(nóng)藥殘留超標蔬菜上市銷售成為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作的重中之重�？刂剖卟酥修r(nóng)藥殘留量關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一就是對蔬菜中農(nóng)藥殘留量及時、準確的分析檢測。因此，在流通領(lǐng)域中加強對蔬菜農(nóng)殘的快速檢測已成為十分必要的監(jiān)管措施。

    1 蔬菜農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀

    蔬菜殘留農(nóng)藥，是指蔬菜在噴施農(nóng)藥后殘留在蔬菜表面的農(nóng)藥及有毒代謝物、降解轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和反應(yīng)雜質(zhì)的總稱。當今社會，人們對經(jīng)濟效益的過度追求導(dǎo)致農(nóng)藥的不規(guī)范使用，農(nóng)藥的大量使用雖然提高了蔬菜產(chǎn)量，但農(nóng)藥殘留卻嚴重危害了人類健康。蔬菜大多數(shù)生長期短，病蟲害比較嚴重，噴灑農(nóng)藥防治病蟲害是蔬菜生產(chǎn)中的重要環(huán)節(jié)，種植過程中需多次施藥，加上施藥后采摘間隔短，造成蔬菜殘留農(nóng)藥過量不可避免。

    目前在蔬菜生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥主要有以下幾種：

    1．1        有機磷農(nóng)藥

    目前我國農(nóng)藥年用量為80～100萬t，居世界首位[1]。其中劇毒的有機磷類農(nóng)藥年使用量約占70％，該農(nóng)藥是廣譜殺蟲劑，應(yīng)用廣泛，主要有毒死蜱、樂果、敵百蟲、敵敵艮、內(nèi)吸磷、對硫磷、馬拉硫磷等60余種，急性中毒多，毫克級的有機磷類農(nóng)藥即可致人畜于死地。當農(nóng)藥殘留在人體中達到一定的數(shù)量，不為人體所分解時，將無法避免地發(fā)生各種病變[2]。有機磷農(nóng)約的毒性主要是對乙酰膽堿酯酶的抑制，引起乙酰膽堿蓄積，使膽堿能神經(jīng)受劍持續(xù)沖動，導(dǎo)致先興奮后衰竭的一系列毒齲堿樣、煙堿樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等癥狀；嚴重患者可因昏迷和呼吸衰竭而死亡[3]。

    1．2        氨基甲酸酯類農(nóng)藥

    該類農(nóng)藥是應(yīng)用很廣的新型殺蟲劑與除草劑，如滅多威(快靈)、抗蚜威、克百威、西維因、殘殺威、殺螟丹等。氨基甲酸酯類農(nóng)藥大多數(shù)屬中、低毒性，中毒原因與有機磷農(nóng)藥相同，也是抑制人體內(nèi)膽堿酯酶，從而影響人體內(nèi)神經(jīng)沖動的傳遞，中毒者會產(chǎn)生和有機磷中毒大致相同的癥狀[4]。

    1．3        擬除蟲菊酯類農(nóng)藥

    目前全世界菊酯類農(nóng)藥在殺蟲劑市場中約占20％，使用面積占整個殺蟲劑面積的25％ [5]。該類農(nóng)藥由于能對害蟲快速擊倒，對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的害蟲有效，對哺乳動物低毒、在白然環(huán)境中容易分解等特點，正成為蔬菜農(nóng)藥的主要替代產(chǎn)品之一[6]。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥主要有氯氰菊脂(滅百可)、溴氰菊脂(敵殺死)、殺滅菌脂(速滅殺丁)等。

    1．4        Bt(蘇云金桿菌)系列農(nóng)藥

    蘇云金桿菌為一種生物源殺蟲劑，對人畜無毒、使用安全，對害蟲選擇性強、不傷害天敵，不污染環(huán)境、沒有殘毒，生產(chǎn)的產(chǎn)品可安全食，同時，也不改變蔬菜的色澤和風味。相對于化學農(nóng)藥更不易產(chǎn)生抗藥性，是無公害蔬菜生產(chǎn)的推薦農(nóng) 。

    1．5        阿維菌素系列農(nóng)藥

    阿維菌素是一種包括昆蟲、螨等節(jié)肢動物的神經(jīng)性毒劑．其機理是干擾昆蟲體內(nèi)神經(jīng)末梢的信息傳遞，從而阻斷神經(jīng)末梢與肌肉的聯(lián)系．使昆蟲麻痹、拒食、死亡。正囚為如此獨特的作用機理．故與常用的殺蟲劑無交互抗性．尤其適用于如小菜蛾這樣對常用的有機磷和菊酯類農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的害蟲．防效尤為顯著[8]。對人低毒，因此是無公害蔬菜生產(chǎn)的推薦農(nóng)藥。

    1．6        昆蟲激素類農(nóng)藥昆蟲激素類農(nóng)藥

    是一類新型農(nóng)藥，由昆蟲激素利對昆蟲生長發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的植物性物質(zhì)制成，或為人工合成的仿昆蟲激素。昆蟲激素是由昆蟲自身分泌并影響其變態(tài)、發(fā)育、繁殖或互相傳遞信息的微量化學物質(zhì)。當它的分泌受到抑制或增加時，蟲的發(fā)育或正常活動即受阻礙、干擾。在多種昆蟲激素中只有一部分可用作農(nóng)藥，其特點是活性高、用量少(一股在1微克以下的劑量即發(fā)生作用)、專一性強且無公害。由于這類藥劑與傳統(tǒng)殺蟲劑毒殺害蟲的致死作用不同，故也稱作“軟殺蟲劑”或第3代殺蟲劑。主要有米滿、卡死克、抑太保等，此類農(nóng)藥見效相對較慢[9]

   1．7        有機氯農(nóng)藥

    有機氯農(nóng)藥由于在土壤中的滯留期均可長達數(shù)年、氯苯結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，不易為生物體內(nèi)酶系降解，所以積存在動、植物體內(nèi)的有機氯農(nóng)藥分子消失緩慢這些特性，通過生物富集和食物鏈作用，造成農(nóng)藥公害[10]。該類農(nóng)藥是高殘毒農(nóng)藥，其中六六六、DDT等我國早已禁用。

    2      蔬菜農(nóng)藥殘留檢測方法

    大致可分為4大類，即生物測定法、化學檢測法、免疫分析法和生化檢測法。

    2．1    生物測定法

    生物測定法利用特定生物對相應(yīng)農(nóng)藥化合物的特定生化反應(yīng)來判斷農(nóng)藥殘留及其污染情況，無需對樣品進行前處理或前處理比較簡單快速，但對供試生物要求較高，測定結(jié)果不能確定農(nóng)藥品種，并且可能山現(xiàn)假陽性或假陰性情況，該方法一般作為引起中毒農(nóng)產(chǎn)品現(xiàn)場檢測。

  

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  2．2        免疫分析法

    有放射性免疫分析、酶免疫分析、多組份分析物免疫分析、免疫傳感器分析等，最為常用的是酶聯(lián)免疫法(ELISA 法)，它主要是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反映為基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留檢測方法，該法利用化學物質(zhì)在動物體內(nèi)能產(chǎn)生免疫抗體的原理，先將小分子農(nóng)藥化合物與大分子生物物質(zhì)結(jié)合成大分子，做成抗原，并使之在動物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，對抗體篩選制成試劑盒，通過抗原與抗體之問發(fā)生的酶聯(lián)免疫反應(yīng)，依靠比色米確定農(nóng)藥殘留，它具有專一性強、靈敏度高、快速、操作簡單等優(yōu)點，試劑盒可廣泛川于現(xiàn)場樣品和大量樣品的快速檢測，可準確定性、定量[11]。但由于受到農(nóng)藥種類多，抗體制備難度大、在不能肯定樣本中存在農(nóng)約殘留種類時檢測有一定的畝目性以及抗體依賴國外進口等影響，酶聯(lián)免疫法的應(yīng)剛范圍受到較大的限制，目前，我國市場上酶聯(lián)免疫法成品試劑盒依賴從國外進口，囚此沒有大范圍推廣使用。

    2．3        化學檢測技術(shù)

    用于農(nóng)藥殘留的化學檢測方法有分光光度法、極譜法、原子吸收光譜法、薄層層析法、氣相色譜法、液相色譜法、同位素標記法、核磁共振波譜法、色質(zhì)聯(lián)用法等，白二十世紀九十年代以米，現(xiàn)代化學分析技術(shù)日新月異，許多新技術(shù)已進入實刖階段，如毛細管電脈儀技術(shù)(CZE)，色質(zhì)聯(lián)剛技術(shù)(GC-MS、HPLC-MS)超臨界流體色譜技術(shù)(SFC)，直接光譜分析技術(shù)等[12]引。這些新技術(shù)的應(yīng)用，大大提高農(nóng)藥殘留分析的靈敏度，簡化分析步驟，提高了分析效率。但是，這些分析方法有的靈敏度不高，如分光光度法、薄層層析法等。有的需要昂貴的儀器，如色質(zhì)聯(lián)用法、核磁共振波譜法等。還有的需要特殊的設(shè)備，如同位素標記法等。因此，目前，普遍采用的還是氣相色譜法利液相色譜法，它們具有簡便、快速、靈敏以及穩(wěn)定性利重現(xiàn)性好，線性范圍寬、耗資低等優(yōu)點。

    2．4        生化檢測技術(shù)

    有機磷與氨基甲酸酯農(nóng)約共為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰兒日堿脂酶抑制物，因此可以利川農(nóng)藥靶標酶．乙酰膽堿酯酶(ACHE)受抑制的程度來檢測有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。該方法目前已開發(fā)出了相應(yīng)的各種速測卡和速測儀。該方法檢測時，蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會對農(nóng)藥殘留物的檢測造成干擾，不必進行分離去雜，省了大量預(yù)處理時間，從而能達到快速檢測的目的，因此該法具有快速方便、前處理簡單、無需儀器或儀器相對簡單，適用于現(xiàn)場的定性和半定量測定，目前的農(nóng)藥殘留快速檢測就是用了該方法，已上升為農(nóng)業(yè)部行業(yè)標準，標準號為NY／T448-2001，名稱為蔬菜上有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測方法，但方法只能用于測定有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑，其靈敏度和所使用的酶、顯色反應(yīng)時間和溫度密切相關(guān)，經(jīng)酶法檢測出陽性后，需用標準儀器檢驗方法進一步檢測，以鑒定殘留農(nóng)藥品種及準確殘留量[13].酶抑制法是我國農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)中研究最多、應(yīng)用最多也相對成熟的一種對部分農(nóng)藥進行殘留快速檢測的生化檢測技術(shù)。

    目前國內(nèi)外蔬菜農(nóng)藥殘留檢測方法主要有2個發(fā)展方向，一是利用色譜法的實驗室定量檢測，二是利用酶抑制法的快速定性檢測[14]。前者雖然具有檢測靈敏度高、結(jié)果相對正確等優(yōu)點，但儀器投資大(動輒30-40萬元，甚至更高)：檢測費用高(每檢測一個樣品均需300-400元)；檢測時間長(樣品前處理手續(xù)復(fù)雜，耗時1～2 h，檢測時間總計需3-4 h)；人員技術(shù)要求高，所以，在日常的蔬菜質(zhì)量安全監(jiān)督(現(xiàn)場檢測)中，要采用定量的檢測方法是不切實際的。后者雖然準確性不及氣相色譜，但具有以下優(yōu)點：一是投入成本小。快速檢測方法實驗環(huán)境要求相對較低；儀器購買費用不到萬元，日常使用中每檢測1個樣品僅需1．0～1．5元；二是技術(shù)要求低�？焖贆z測試驗程序簡單，技術(shù)要求不高。植保系統(tǒng)的工作人員，經(jīng)過系統(tǒng)培訓完全可以勝任。三是檢測速度快�？焖贆z測且試驗步驟簡捷，檢測一例樣品約20分鐘，特別適合在果蔬生產(chǎn)基地和蔬菜批發(fā)市場上市前農(nóng)藥殘留毒性的檢測使[15]。我站現(xiàn)使用PR-203-6T農(nóng)藥殘留快速測試儀(廈門市信儀科技有限公司生產(chǎn))對蔬菜批發(fā)市場蔬菜上市前農(nóng)藥殘留毒性的檢測

    3 蔬菜農(nóng)藥殘留快速測試儀在蔬菜農(nóng)殘檢測上的應(yīng)用

    3．1 工作原理

    在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謂十產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解，其水解產(chǎn)物與顯示劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在412 nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。

    3．2 檢驗依據(jù)是GB／T5009．199．2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》[16]。

    3．3 所用試劑

    廣州綠洲生化科技有限公司出品的蔬菜農(nóng)藥殘留檢測專用試劑(分析純)。

    試劑的配制：① pH8．0緩沖液：取一包磷酸鹽加入500ml純凈水中攪拌溶解，常溫保存。

    ② 酶制劑(含乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶)。

    ③ 底物：取一瓶加2．5ml純凈水溶解，4℃水箱保存。

    ④ 顯色劑：取一瓶加25ml磷酸緩沖液溶解同，避光保存。

    3．4 分析步驟

    3．4．1 對照測試先于試管中加入2．5ml緩沖溶液，再加入0．1ml酶液、0．1ml顯色劑，搖勻后放置10min (每批樣品的控制時間應(yīng)一致)。再加入0．02ml底物搖勻，應(yīng)立即放入儀器比色池中，按<對照>鍵進行對照測試。

    3．4．2 樣品提取選取lg有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，切成　1 cm　左右見方碎片，放入試管中，加入5ml緩沖液，振蕩1-2min，倒出提取液即為待測樣品。每個蔬菜樣品的選取前均須將砧板和刀具洗凈、擦干，以避免交叉污染。

    3．4．3 樣品溶液測試先于試管中加入2．5ml樣品提取液，再加入0．1ml酶液、0．1ml顯色劑，搖勻后放置10min (每批樣品的控制時間應(yīng)一致)。加入O．02ml底物搖勻，立即放入儀器比色池中，按<樣品>鍵進行測試。

    3．4．4 檢驗結(jié)果計算

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

    3．4．5 檢驗結(jié)果判定抑制率 50％時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果，為不合格。抑制率<50％時，表示蔬菜中有低劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陰性結(jié)果，判定合格。

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